Leucemia Mieloide Crónica (Hibridación in situ fluorescente [FISH])

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FISH técnica que detecta secuencias de ADN en células mediante una sonda (fluorocromo). En la LMC se detecta la translocación BCR-ABL (con sonda), revela la unión de 2 genes separados por translocación de fragmentos cromosómicos, hibridados de diferente color. En el gen Target abarcan varios Kb dirección 3’ y 5’. Parte de la sonda queda en el cromosoma original y otra va al derivado, al combinarse generan 2 señales de fusión. Cromosoma Philadelphia paso a yuxtaposición de genes BCR y ABL, igual a una proteína oncogénica.

Referencias bibliográficas: 

1- Pavón V, Bendeck L, Gersen S. Hibridación in situ fluorescente (FISH) herramienta en el diagnóstico de Leucemia Mieloide Crónica. Cibic Laboratorios [Internet]. 2021 [citado 2023 Dic 22]; 14(2). Disponible en: https://www.cibic.com.ar/home/hibridacion-in-situ-fluorescente-fish-herramienta-diagnostico-leucemia-mieloide-cronica/      

2- Velandia T, Medina R, Mejía J, Pardo G. Hibridación in situ fluorescente (FISH) en el Instituto Nacional de Cancerología (INC) de Colombia Experiencia de 5 años. Revistacancercol.org [Internet]. 2019 [citado 2023 Dic 22];23(1):12-16. Disponible en: https://www.revistacancercol.org/index.php/cancer/article/view/73/665

Técnicas de PCR en el diagnóstico de VIH-1 en recién nacidos

Tema: Diagnóstico y detección de la carga viral VIH-1 en recién nacidos.

Objetivo: Establecer el diagnóstico temprano y cuantificar la carga viral del VIH-1.

Muestra: Sangre periférica.

Tipo de ácido nucleico: ARN viral.

Extracción (lisis, separación, purificación): Se utilizó el kit de extracción de ácidos nucleicos QIAamp Viral RNA Mini Kit de Qiagen.

Genes para analizar: Genes Env 300 pb - Gag 800 pb.

Tamaño en pares de base: Gen Env fragmentos de 300 pb y gen Gag 800 pb.  

Tipos de PCR: PCR en tiempo real (qPCR) utilizando sondas de hibridación específicas para el VIH-1.

Pasos (35 ciclos durante 2 minutos):

1. Desnaturalización: 95°C durante 30 segundos.
2. Alineamiento: 55°C durante 30 segundos.
3. Elongación - Extensión: 72°C durante 1 minuto. 

Amplificación completa con una extensión final de 72ºC durante 7 minutos.

Visualización:

• >100.000 copias/ml (5.0 log10) cargas virales altas 82,4%.
• 10.000 a 100.000 copias/ml (4.0 log10 - 5.0 log10) cargas virales intermedias 17.6%. 

Cada uno de los pacientes que resultó positivo en las pruebas de PCR se les solicitó una segunda muestra para la confirmación del resultado.

Referencias bibliográficas:

1- Detección VIH-1 por rt-PCR. Bioted.es [Internet]. 2019 [citado 2023 Dic 15];2(1):5-9. Disponible en: https://www.bioted.es/protocolos/DETECCION-VIH-RT-PCR.pdf

2- De G, Clínica P. Prevención, diagnóstico y tratamiento de la infección por el virus de inmunodeficiencia humana (VIH-1) en embarazadas, niños, adolescentes y adultos. Gob.ec [Internet]. 2019 [citado 2023 Dic 15];8(2):8-14. Disponible en: https://www.salud.gob.ec/wp-content/uploads/2019/06/gpc_VIH_acuerdo_ministerial05-07-2019.pdf

Carcinoma hepatocelular CHC (Alteración epigenética)

Respuesta válida porque la hipermetilación del promotor gen p16INK4a es clave en el CHC. Hipermetilación sí inhibe la expresión del gen, promueve la proliferación celular descontrolada y la progresión tumoral. Hipometilación del ADN contribuye activando genes prooncogénicos.

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Referencias bibliográficas:  

1- Seif A, Aly H, Elzoghby D, Elbreedy A, Lotfy M. La metilación aberrante de p16 como marcador de diagnóstico temprano en la sangre de pacientes con carcinoma hepatocelular. Med Hum Genet [Internet]. 2019 [citado 2023 Dic 6];27(20):74-78. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1186/s43042-019-0027-0

2- Andrisani O. Mecanismos epigenéticos en el carcinoma hepatocelular asociado al virus de la hepatitis B. Hepatoma Res [Internet]. 2021 [citado 2023 Dic 6];7(12). Disponible en: http://dx.doi.org/10.20517/2394-5079.2020.83