Tema: Diagnóstico y detección de la carga viral VIH-1 en recién nacidos.
Objetivo: Establecer el diagnóstico temprano y cuantificar la carga viral del VIH-1.
Muestra: Sangre periférica.
Tipo de ácido nucleico: ARN viral.
Extracción (lisis, separación, purificación): Se utilizó el kit de extracción de ácidos nucleicos QIAamp Viral RNA Mini Kit de Qiagen.
Genes para analizar: Genes Env 300 pb - Gag 800 pb.
Tamaño en pares de base: Gen Env fragmentos de 300 pb y gen Gag 800 pb.
Tipos de PCR: PCR en tiempo real (qPCR) utilizando sondas de hibridación específicas para el VIH-1.
Pasos (35 ciclos durante 2 minutos):
- Desnaturalización: 95°C durante 30 segundos.
- Alineamiento: 55°C durante 30 segundos.
- Elongación - Extensión: 72°C durante 1 minuto.
Amplificación completa con una extensión final de 72ºC durante 7 minutos.
Visualización:
- >100.000 copias/ml (5.0 log10) cargas virales altas 82,4%.
- 10.000 a 100.000 copias/ml (4.0 log10 - 5.0 log10) cargas virales intermedias 17.6%.
Cada uno de los pacientes que resultó positivo en las pruebas de PCR se les solicitó una segunda muestra para la confirmación del resultado.
Referencias bibliográficas:
1- Detección VIH-1 por rt-PCR. Bioted.es [Internet]. 2019 [citado 2023 Dic 15];2(1):5-9. Disponible en: https://www.bioted.es/protocolos/DETECCION-VIH-RT-PCR.pdf
2- De G, Clínica P. Prevención, diagnóstico y tratamiento de la infección por el virus de inmunodeficiencia humana (VIH-1) en embarazadas, niños, adolescentes y adultos. Gob.ec [Internet]. 2019 [citado 2023 Dic 15];8(2):8-14. Disponible en: https://www.salud.gob.ec/wp-content/uploads/2019/06/gpc_VIH_acuerdo_ministerial05-07-2019.pdf
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